C57BL/6小鼠是使用最廣泛的近交係小鼠，被應用於免疫學、神經生物學、腫瘤學等生命科學研究，同時也是基因工程小鼠的最（zuì）主要背景（jǐng）品係。在（zài）免疫學研究中，從C57BL/6小鼠脾髒中（zhōng）獲取免（miǎn）疫細胞是一種常規操作。

請想象以下場景：正在取（qǔ）小鼠脾髒的學生發現脾髒出現（xiàn）了黑色斑點（圖1），“老師，大事（shì）不好，我們的（de）小鼠怕是被感染了。你看，小鼠的脾髒壞死了，一端已（yǐ）經變黑了（le）。”估計很多動物設施管理者都會被驚（jīng）出一身冷汗。

筆者查閱了相關文獻並做了初步實驗，確定該現象是非白化（huà）小鼠自身的色素在脾髒沉積的自然現象且與毛發生長（zhǎng）周期性（xìng）有（yǒu）關（guān），對基礎免疫學實驗沒有影響。

01、PART

C57BL/6小鼠脾（pí）髒出現黑（hēi）色斑點的現象，首次（cì）報道（dào）要追溯到1967年，Weissman等人在上免疫學實驗課時發現C57BL/Ka和C57BL/6小鼠的一些脾髒上有（yǒu）黑色的斑點。C57BL/Ka×Balb/c F1代小鼠的脾髒上也（yě）發現了（le）黑（hēi）色斑點，但是（shì）Balb/c小（xiǎo）鼠（白化小鼠）脾髒無黑色斑點。初步研究發現該現象沒有明顯的孟德爾遺傳規律。隨後的（de）實驗發（fā）現脾髒（zāng）中的黑色斑點不（bú）能（néng）被普魯氏（shì）藍染色，排除了含鐵的色素。

另外可以用DOPA氧化酶染色，可以被過氧化氫漂白，說明脾（pí）髒黑色（sè）斑（bān）點中含有真（zhēn）黑（hēi）色素（sù）（melanin）[1]。該現象加幾個實驗組成的文章發表在Nature（發（fā）頂刊這麽容易（yì）嗎？有沒有被驚到）。文中Weissman等人討論（lùn）了這些黑色素細胞可能是從其它組織遷移而來。

02、PART

1977年，Auriol C等人在對C57BL/10接種支（zhī）原體的實驗中也發現了這種現象（xiàng），並排除了支原（yuán）體感染的影響[2]。1989年，Veninga, T.S等人動用了（le）電鏡等多種觀察手段，發現是脾髒紅髓中的巨噬（shì）細胞吞噬了色素顆粒[5]（圖2）。

1995年，van der Heijden等人研究進一（yī）步認為脾髒黑（hēi）色斑點主要是由真黑（hēi）色素（melanin）造成的，脂褐質（lipofuscin）或血鐵黃素（haemosiderin）不是造成該現象的主要色素。

至（zhì）此，對小鼠脾髒黑色（sè）斑點的（de）研究主要集中在切片鏡檢等光學形態學觀察（chá）手段[4]。

03、PART

更深入（rù）的研究出現在2005年，從事（shì）色素（sù）研究的Przemyslaw M. Plonka等人首次使用電子順磁共振波譜（EPR）證明了C57BL/6脾髒黑斑含有真黑色素（melanin）。並且還發現脾髒黑斑現象與毛發周期之間的相關性（圖3），他們發現在小鼠毛發周期的退化期，存在多達（dá）50-80%的黑色素沉著脾髒，而在處於毛發周期深層休止期的小鼠中，黑色素變性脾髒的百分比約為15%。EPR觀察（chá）到的脾（pí）髒真黑色素與皮膚中發現的色（sè）素（毛囊黑（hēi）色素細胞和發幹）不同。與皮膚色素相比，其功率飽和度和線寬揭示了順磁性中心（xīn）的異質性，這表明色素存在部分降解[6]。

04、PART

2009年（nián）Przemyslaw M. Plonka已經成為（wéi）通訊作（zuò）者（zhě），他們實驗室延續了（le）前麵的研究，發現（xiàn）與年輕C57BL/6小（xiǎo）鼠相比，老年C57BL/6小鼠沒有表現出肉眼可見的脾髒黑斑。認（rèn）為（wéi）小鼠的（de）脾髒黑色（sè）素沉著現象一（yī）定程度（dù）上與毛（máo）發周期同步的皮膚黑色素沉著有關，並且脾髒黑色素在小鼠一生中逐漸降解。因此小鼠脾（pí）髒黑色素（sù）沉著可能是一種研究體內衰老和黑色素降解機製的獨特現象[7]。

2015年Przemyslaw M. Plonka實驗室繼續發現脾髒黑色斑點也出（chū）現在（zài）129/SvJ野（yě）鼠（shǔ）色（agouti）小鼠上（圖4）。由於野鼠色agouti（agouti）表型是小型野生哺乳動物（如齧齒動物）的基本（běn）表型，對它們來說是一種偽（wěi）裝色（sè）。這說明與毛（máo）發色（sè）素沉著相關的脾（pí）髒黑色斑（bān）點現象（xiàng）並不是（shì）一種（zhǒng）僅在實驗室近交（jiāo）係小鼠中觀察到的奇異現象。這一現象也可能出現在（zài）野（yě）外動物上（shàng）[3]。

有關小鼠毛色更詳盡深入的內容可參閱本公眾號前文《小鼠的毛（máo）色是如何形成的？》及《小鼠毛色變化的分子成因》。

筆者實驗室經常做小鼠胚胎（tāi）移植實驗，需要用到大量C57BL/6（黑色）小鼠和ICR（白化）小鼠。經過一（yī）段時（shí）間的觀察，發現不同批次C57BL/6小鼠脾髒黑斑出現（xiàn）的平均概率（lǜ）在15%左右，無明顯遺傳規律。ICR小（xiǎo）鼠脾髒無（wú）黑斑現象。

筆者通過HE染色切片，發現與正常脾髒相比，黑斑脾髒的紅髓、白髓、生發中心等結構完整，數量正常，無炎症和（hé）壞死現（xiàn）象（圖5）。黑斑脾髒中紅（hóng）髓部分（fèn）散落著明顯的黑色細胞。六胺銀染色結果顯示黑（hēi）色斑塊形狀、大小完全不一致，可以排除微生物感染（圖5），與Veninga, T.S等人的（de）實驗結果類似[5]。

筆者還檢測了黑斑（bān）脾髒的C57BL/6小鼠的血常規數據，並使用流式細胞術檢測CD4+和CD8+陽性T細胞的（de）比例，發現與無（wú）黑斑脾髒（zāng）小鼠相比無顯著差（chà）別（結果不顯示（shì））。

小鼠脾髒黑色斑點這（zhè）種現象貌（mào）似沒有太大用處，目前可以確定（dìng）小鼠基礎生理指標和一（yī）些基（jī）礎免疫學指標正常，對免疫學研究應沒有影響。但是否可以作為人類（lèi）色素沉著症的模型（xíng）需要進一步研究考察。

參考文獻：

[1] Weissman, I., Genetic and histochemical studies on mouse spleen black spots. Nature, 1967. 215(5098): p. 315.

[2] Auriol C, Hill,., H. Georgis, and J. Breaden, Pigment in the spleen of C57BL/10ScSn and related mice. Experientia, 1977. 33(7): p. 954-5.

[3] Michalczyk-Wetula, D., J. Wieczorek, and P.M. Plonka, Splenic melanosis in agouti and black mice. Acta Biochimica Polonica, 2015. 62(3): p. 457-463.

[4] van der Heijden, A., et al., Spleen pigmentation in young C57BL mice is caused by accumulation of melanin. Lab Anim, 1995. 29(4): p. 459-63.

[5] Veninga, T.S., R.A. Wieringa, and H. Morse, Pigmented spleens in C57BL mice. Lab Anim, 1989. 23(1): p. 16-20.

[6] Plonka, P.M., et al., Splenic eumelanin differs from hair eumelanin in C57BL/6 mice. Acta Biochimica Polonica, 2005. 52(2): p. 433-441.

[7] Michalczyk, D., et al., Extradermal melanin transfer? Lack of macroscopic spleen melanization in old C57BL/6 mice with de-synchronized hair cycle. Acta Biochimica Polonica, 2009. 56(2): p. 343-353.