骨髓穿刺抽吸（xī）技（jì）術  

骨髓（suǐ）穿刺抽（chōu）吸技術的早期發展主（zhǔ）要集中在人類醫學領域，隨後逐漸應用於動物研究。最（zuì）初的技術較為簡單，主要用於獲取骨髓樣本以進行血液學和病理學分析。隨（suí）著研究需求的增加，骨髓穿刺抽吸的技術逐漸得到了改進和優化，設備改進方麵引入了專用的骨髓穿（chuān）刺針，這些穿刺針（zhēn）具備更好的設計可（kě）以（yǐ）減少組織（zhī）損傷和提高樣本質量，以及（jí）在操作過程中引入嚴格的無菌技術以減少（shǎo）感染的風險。

骨髓穿刺技（jì）術不僅在醫學研究中（zhōng）得到廣泛應用還（hái）擴展到多個領域。藥物研發，評估新藥對骨髓的影響（xiǎng），尤其（qí）是抗癌藥和免疫抑製藥物的研究中；毒理（lǐ）學（xué）研究（jiū）中，同樣需要研究有毒物質對骨髓的影響；此外，基因治療，通過獲取骨髓細胞進行基（jī）因組研究（jiū）和基因編（biān）輯實驗等都需要進行骨（gǔ）髓穿刺。本文將（jiāng）介（jiè）紹實（shí）驗犬（quǎn）的骨（gǔ）髓穿刺抽吸技術。

采集部位

對於（yú）犬，骨髓樣本通常從股骨轉子窩、肱骨近端或髂骨（gǔ）翼采集（jí），其（qí）他部位包括胸骨、肋骨（gǔ）。如果骨（gǔ）盆和（hé）股（gǔ）骨區域（yù）含有豐富的脂肪（fáng）組織，采（cǎi）集則會變得更具挑戰性。下文主要講述犬肱骨近端骨髓采集的操作程序。

肱骨近端骨髓采集

材料和設備（bèi）

○ 無菌手套

○ 電（diàn）動剪毛器和清潔溶液

○ 局部麻醉藥（如利多卡因、布比卡因）

○ 含有2.5% - 3%乙二（èr）胺四乙酸溶液（EDTA約2 mL）的培養皿

○ 玻璃顯微鏡（jìng）載玻片

○ 顯微血（xuè）細胞比容毛細血管（圖A），有毛細血管球

○ 11號手術刀片

○ 無菌紗（shā）布

○ 10或12ml注射器

○ 14G至18G帶針芯（xīn）的骨髓針（圖B和C）

A：骨髓穿刺（cì）所需的材料和設備（bèi）

B：帶蓋和針芯的穿刺針（zhēn）

C：已（yǐ）移（yí）除蓋（gài）和針芯的穿刺（cì）針

操作步驟

1、在進行深度鎮（zhèn）靜或全身（shēn）麻醉後，動物側臥位，修剪采集部位的毛發，可以在采集部位皮（pí）下注射局部麻醉劑（如（rú）利多卡因、布比卡因），采集部位無菌清（qīng）洗。如圖1A。

圖1A：動物側臥位，采（cǎi）集部位的毛發已剔除。

2、打開並佩戴無菌手（shǒu）套。助（zhù）理輔助將穿（chuān）刺針、注射器（qì）和手術刀（dāo）片打開並放入無菌區域，或將這（zhè）些物品以無菌的方式遞（dì）給術者。使用10或12ml的注射器，在保持無菌的情況下，抽取約1ml的EDTA溶液。如圖（tú）1B 。

圖1B：從培養皿中抽取（qǔ）EDTA溶液

3、將注射器放置在無菌區域內。移除穿刺針的蓋（gài）子和針芯，通過順時針旋轉確保針頭的防護（hù）裝置牢固地連接在（zài）針頭（tóu）的基部。將含有EDTA的注射器連接到針頭的頂（dǐng）部並旋緊。通過將EDTA噴回培（péi）養皿來灌注針頭，留下約0.5 mL的EDTA在注射器（qì）中（zhōng）。灌注時保持在培養皿上方，不要讓無菌針頭的尖端接觸培養皿，然（rán）後將注射器（qì）從針頭上移（yí）除，置於無菌區（qū）域內。重新裝上針芯和蓋子。注：在大型犬中，可以移除（chú）針頭防護（hù）裝置，以（yǐ）方便進入髓腔。如圖（tú）1C。

圖1C：用EDTA溶液灌注穿刺針

4、觸摸並確定肱（gōng）骨近端外側（cè）的平坦區域，位於大結節的遠端。確（què）定肩胛骨和肱骨之間的肩（jiān）關（guān）節，以確（què）保不會誤采到該區域（yù）。在平坦區域（yù）正上方的皮（pí）膚上切開一個小口。如圖（tú）1D。

圖1D：在肱骨近端外側的平坦區域切開一個小口

5、牽拉皮膚，將針頭“彈入”切（qiē）口，確保針頭已穿透（tòu）深層（céng）皮下組（zǔ）織。重新確（què）認肱骨近端外側的（de）平坦區域，位於大結（jié）節的遠端。將針尖直接放在骨頭上，垂直於平麵。以順時針（zhēn）和逆時（shí）針旋轉的方式適度施加（jiā）壓力，直至針頭穿透近端骨皮質。穿透皮質後，減（jiǎn）小角度，使針（zhēn）頭朝向（xiàng）肘部，平行於髓腔。繼續扭轉，直到針（zhēn）完全嵌入骨內。如（rú）圖1E。

圖1E：穿刺針彈入切口

6、移除蓋子和針芯，並迅（xùn）速連接含有EDTA的注射器。抽吸至可見紅骨髓（2 ~ 5 mL足夠（gòu）），並（bìng）將內容物排出（chū）到培養皿。如圖1F。

圖1F：將（jiāng）骨髓吸入裝有EDTA的注射器（qì）

7、骨髓包（bāo）含在白色的針狀物中，表明穿刺成功（gōng）。使用毛細管或帶有毛細管球或移液管球的巴（bā）斯德（dé）移液管取出並排出這些顆粒，用於血塗片製備。每片至少（shǎo）需要（yào）1個針狀（zhuàng）物；然而，建議每張載玻片至少有3 ~ 5個較大的針狀物（wù），以進（jìn）行充（chōng）分評估。任何剩餘的骨髓內容物都可以收集到EDTA管中，並與載玻（bō）片一起（qǐ）送往實驗室。如（rú）圖1G。

圖1G：使用巴斯德吸管取出顆粒以製備血塗片

8、在動物恢複後（hòu）給與鎮痛藥（yào）物，並根據需（xū）要繼續使用。

潛在的不良反應、緩解措施或治療方法

1、采樣部位感染（rǎn），但這種情況很少見

2、對軟組（zǔ）織如神經、肌肉和關節表麵的創傷（shāng）

3、采（cǎi）樣部位出血

4、術後疼痛

緩解（jiě）措施

○ 密切注意無菌技術（shù）

○ 仔細（xì）辨別解剖標誌，準備骨骼/骨標本以正確（què）找到解剖（pōu）標誌，避免對周圍（wéi）組（zǔ）織造成（chéng）意外創傷

○ 對采樣部位施（shī）加直接壓力，髓內出血不會引（yǐn）起大的問題，因（yīn）為血液會迅速被（bèi）吸收

○ 術後疼（téng）痛通常是短暫的，鎮痛藥用作鎮靜/麻醉的預藥通常（cháng）是足夠的，但如果需要也可以（yǐ）在術後使用

小結

為了提高骨髓穿刺抽吸的成功率和樣本質（zhì）量，必須製定全麵的標準操作程序（SOP），涵蓋動物準備、麻醉管理、穿刺操作（zuò）及（jí）樣本處理等各個環節，並對實驗人員進行係統且廣泛的培訓。此外，實驗研究人員應持續優化和改進技術，精細化操（cāo）作流程，提升效率與準確性，從而為生物醫學（xué）研究提供高質量的樣本和（hé）可靠的數據（jù）支持。