簡介

盡管存在解剖和生理上的差異，小鼠在研究（jiū）人類肺部疾病，包括急性（xìng）肺損傷（ALI）和肺纖維化方麵仍具有極高的價值。治療方法是諸多肺部疾病研究的核心，其中口咽吸入法（OPA）已被廣泛用，但其缺點是部分藥劑可能被吞入胃腸道，從而導致給藥劑量的不準確；另一種是經氣（qì）管給藥，這（zhè）涉及到在深度麻醉狀態下切開（kāi）氣管直接將藥物注入到呼吸道，然而，這種操作不僅因其（qí）侵入性和造成呼吸（xī）道損傷而不可取，還存在耗時過長，且操作者需要（yào）大量的訓練等問題。

1999年，Brown等人發表研究論文描述了一種小鼠（shǔ）肺部直接插管（guǎn）的方法，後續也有其他（tā）幾篇論（lùn）文（wén）描述了（le）不同（tóng）的小鼠肺部插管方法，但這種插管的主要問題是：當插管導管接（jiē）近（jìn）氣管並準備插入時，導管本身會阻擋光線，從而無法（fǎ）看清需要插入的位置。

本文展示了如（rú）何簡（jiǎn）單、低成本地消除這個可視化問題，從（cóng）而（ér）確保在相對少的培訓或經驗下成功進行插管。

方法

準備（bèi）：

1、導管。對於20-35 g小鼠的插管（guǎn），我們使用1或1.5英寸長，20 g IV導管(BD Insylte, Sparks, MD或Jelco Optiva, Carlsbad, CA)。可以為每隻（zhī）小鼠使用新的無菌導管，但導管也可以在（zài）消毒後用70%乙醇浸泡過夜重複使用。盡管小鼠的咽部和氣管不是無菌的，但應（yīng）遵循適（shì）當的（de）清（qīng）潔程序，包括使用無菌手套和器械。

2、光纖電纜。我們使用約70厘米長、0.5毫米粗的Edmund Optics光纜，但長度不是決定性的因素。重要的是要（yào）確保纖維的邊緣是平滑的，因為在用剃刀切割電纜後，邊緣相對較銳利，很容易刺穿氣管壁。然而隻需將（jiāng）光纖端部放在（zài）1000粒度的砂紙上，就可以非常容易地打磨平這個邊緣。另一端插入橡膠塞中。最簡便的方法是先用18號針通過橡膠塞，插入光纖通過針孔，然後撤（chè）出針。橡膠塞連接150瓦鹵素光源。重要的是要確保（bǎo）使用矽膠（jiāo）橡膠塞(或其他耐熱材料)，因為普通橡膠或軟（ruǎn）木在靠近熱光源時可能（néng）會（huì）燃燒。

插（chā）管：

1、參見圖（tú）1和2。通過一段短矽橡膠（jiāo）管(ID≈0.8 mm×OD 4mm, Cole-Palmer, EW-96410-13)插入（rù）光纖電纜。將這個橡膠管係緊（jǐn），同（tóng）時仍然允許調整光纖電纜。將矽膠管緊（jǐn）密地插入套（tào）管的魯爾端，固定光纖電（diàn）纜在套管內的位置。調整光纖（xiān）電纜的（de）位置，使其在套管尖端前方約4毫米處穿過套管。

圖1.如圖所示，光（guāng）纜（lǎn）插入（rù）矽橡膠塞中，與其相對的另一（yī）端緊綁著一小（xiǎo）段矽橡（xiàng）膠管。

圖（tú）2.圖（tú）片展示了橡膠塞與光源的連（lián）接，光（guāng）纖的另一端穿過插管導管。左側還展示了一個簡單的支架，用（yòng）於在插管過程中固定（dìng）小鼠。

2、將麻（má）醉後的小鼠放置在垂直支架上，由其上切牙懸掛(圖3)。大多數研究者（zhě）發現，當小鼠的腹側（cè）麵向自己時，視覺效果最佳。非常輕（qīng）柔地（dì）拔出舌頭，用拇（mǔ）指和（hé）食指握住。中指放在頸（jǐng）部和塑料支架之間。利用食指和拇指對舌頭的牽引開啟口腔，並用頸部後方的中指調整頭部的角度，使插管（guǎn）路徑伸直，如圖3所示。

圖3.兩個視角（jiǎo）展（zhǎn）示了準備（bèi）插管的小鼠位置

3、使用光纖電纜作為光源（yuán）和導入器，推動它通過（guò）可視化聲帶。如果看不到聲帶，可以（yǐ）通過中指作為支點，輕輕用力拉舌頭（tóu）。插入後，將套管再向前推進約5 mm。然後，小（xiǎo）心不要移動套管，拔出光纖電纜。將小鼠平（píng）躺下來，用膠帶固定導管（guǎn），並（bìng）用橡皮泥(塑型（xíng）黏土)支撐導管接頭，如圖4所示。

圖4。此圖展示（shì）了一隻準備通氣的已插管小鼠。圍繞嘴部的膠帶有助於防止導管移（yí）動（dòng）。一小塊橡皮泥(建模黏土)提供了一個便利的支撐點，用於固定導管接頭與呼吸機的連接。

4、步驟3中的（de）操作不容易演示或教（jiāo）學，因為這是一個單獨的（de）操作。然而，通過對舌頭的牽引（yǐn）力和頭部後麵的支撐的微妙調整，幾乎所有嚐試這種方法的（de）人都會很快找到正（zhèng）確的方式來調整小（xiǎo）鼠的位置，使（shǐ）聲帶可（kě）視化。

總（zǒng）結

本文描述的方法有（yǒu）幾個優點。首先，裝置簡單且價（jià）格低廉。製作裝置不需要任何特殊（shū）工具或昂貴的設備。在實踐中，對於從未嚐試過插管的研究員、學（xué）生和技術人員來說更容易掌握。

在進行插管時，有幾個實際問題需（xū）要提及。在最初打開小鼠（shǔ）口腔時，盡量輕柔拉舌頭非常（cháng）重（chóng）要。如果使用無保護鉗，很容易損傷舌頭（tóu），這可能導致小鼠死亡。在首次學習如何插管時，最重要的是使用頸部後方的手指來調整頭部角度，以使氣管開口的可視化（huà）。如（rú）果操作正確，對舌頭進行足夠的牽拉，很容易看到聲帶。最初的可視化步驟通（tōng）常需要最（zuì）多的（de）時間，因（yīn）為一旦看到氣管開（kāi）口，插入纖維電纜（lǎn）和靜（jìng）脈導管就相對簡單了。

總之，本文描述的插（chā）管方法製作（zuò）成本低，使用（yòng）簡單，可以令大多數研究人員和實驗室技術人員（yuán）在相對較（jiào）少的經驗下快速掌握（wò）小鼠插管技術。